Burlon, Oliver:
Expression und Aufreinigung von Connexinen für ESR-spektroskopische Untersuchungen
Duisburg, Essen, 2001
2001DissertationOA Gold
BiologieFakultät für Biologie
Titel in Deutsch:
Expression und Aufreinigung von Connexinen für ESR-spektroskopische Untersuchungen
Autor*in:
Burlon, Oliver
Akademische Betreuung:
Winterhager, ElkeUDE
LSF ID
13688
Sonstiges
der Hochschule zugeordnete*r Autor*in
Erscheinungsort:
Duisburg, Essen
Erscheinungsjahr:
2001
Open Access?:
OA Gold
Umfang:
87 Bl.
DuEPublico 2 ID
Signatur der UB:
Notiz:
Dissertation, Universität Duisburg-Essen, 2001
Sprache des Textes:
Deutsch

Abstract:

In dieser Arbeit konnte erstmals ein Connexin, Cx43, stabil in Insektenzellen exprimiert werden. Dieses heterologe Expressionsystem ermöglicht die posttranslationale Aggregation der Connexine zu Halbkanalstrukturen. Die vergleichweise schnelle Etablierung stabiler, überexprimierender eukaryonter Transfektanten ist im Hinblick auf das für die ESR-Spektroskopie typische Cysteinscreening von großem Vorteil. Für dieses Cysteinscreening konnte eine erste Cysteinmutante, K146C, kloniert und in den Insektenzellen zur Expression gebracht werden. Es konnte eine neue Aufreinigungsmethode für Connexine etabliert werden, die Zwei-Schritt-Gelfiltration. Sie erlaubt die Isolation hochreiner Cx-Halbkanäle unter nativen Bedingungen. Erste ESR-Spektren von Wildtyp-Cx43-Halbkanälen konnten aufgezeichnet werden. Sie belegen, daß drei der neun nativen Cysteine des Cx43 für die Spinsonde zugänglich sind und diese kovalent binden.